117. СРЕДА ДЛЯ METHANOSARCINA

Раствор 1:

NaCl 0.9 г

MgCl₂ × 6 H₂O 0.2 г

CaCl₂ × 2 H₂O 0.1 г

NH₄Cl 1.0 г

Дрожжевой экстракт 2.0 г

Резазурин 0.0 1 г

Mетанол 10% 10.0 мл

Раствор микроэлементов (см. ниже) 10.0 мл

Раствор витаминов (см. ниже) 5.0 мл

Дистиллированная вода 965.0 мл

Раствор 2 (восстановители):

Цистеин-HCl 0.5 г

Na₂S × 9 H₂O 0. 5 г

Дистиллированная вода 10.0 мл

Буферные растворы:

а) K₂HPO₄ 29.0 г

Дистиллированная вода 100.0 мл

б) KH₂PO₄ 15.0 г

Дистиллированная вода 100.0 мл

Раствор микроэлементов:

Нитрилотриуксусная кислота 12.8 г

FeSO₄ × 7 H₂O 0.1 г

MnCl₂ × 6 H₂O 0.1 г

CoCl₂ × 2 H₂O 0.17 г

CaCl₂ × 2 H₂O 0.1 г

ZnCl₂ 0.1 г

CuCl₂ 0.02 г

H₃BO₃ 0.01 г

Na₂MoO₄ × 2 H₂O 0.01 г

NaCl 1.0 г

Na₂SeO₄ 0.017 г

Дистиллированная вода 1000.0 мл

Растворить нитрилотриуксусную кислоту, нейтрализуя раствор KOH, внести остальные соли. Довести объем до 1000.0 мл. Довести pH до 7.0, используя KOH.

Раствор витаминов:

Биотин 2.0 мг

Фолиевая кислота 2.0 мг

Пиридоксин 10.0 мг

Рибофлавин 5.0 мг

Пантотеновая кислота 5.0 мг

п-Аминобензойная кислота 5.0 мг

Тиамин-HCl 5.0 мг

Никотиновая кислота 5.0 мг

Витамин B₁₂ 0.1 мг

Липоевая (тиоктовая) кислота 5.0 мг

Дистиллированная вода 1000.0 мл

pH 7.2-7.4

Среду готовить анаэробно, продувая бескислородным N₂ перед стерилизацией. Основную среду, раствор микроэлементов, буферные растворы и восстановители стерилизовать отдельно автоклавированием при 121°C 15 мин. Раствор витаминов стерилизовать фильтрованием.

Последнее изменение: 17.07.2021