313. СРЕДА ДЛЯ PYROCOCCUS

NaCl 13.85 г

MgSO₄ × 7 H₂O 3.5 г

MgCl₂ × 6 H₂O 2.75 г

KCl 0.33 г

NaBr 0.05 г

H₃BO₃ 15.0 мг

SrCl₂ × 6 H₂O раствор (0.1% в/о) 7.0 мл

(NH₄)₂SO₄ 10.0 мг

Лимонная кислота, раствор (0.1% в/о) 5.0 мл

KI раствор (0.01% в/о) 0.5 мл

CaCl₂ × 2 H₂O 0.75 г

KH₂PO₄ 0.5 г

NiCl₂ × 6 H₂O (0.1% в/о) 2.0 мл

Раствор микроэлементов (см. ниже) 10.0 мл

Пептон (BD Bacto) 5.0 г

Дрожжевой экстракт (OXOID) 1.0 г

Na-резазурина раствор (0.1% в/о) 0.5 мл

Сера, тонкодисперсная 30.0 г

Нейтрализованный сульфидный раствор 16.7 мл

Дистиллированная вода 1000.0 мл

Нейтрализованный сульфидный раствор:

Na₂S × 9 H₂O 3.0 г

Дистиллированная вода 100.0 мл

Сульфидный раствор готовить во флаконе на 250 мл с завинчивающейся крышкой с бутилкаучуковой пробкой на магнитной мешалке. Раствор продуть 100% N₂ и Автоклавировать при 121°C 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры довести pH до 7.0, добавляя стерильную 2 N H₂SO₄ по каплям с помощью шприца, не открывая бутылку. Желтая окраска появляется при снижении рН примерно до 8. Раствор следует непрерывно перемешивать, чтобы избежать выпадения элементной серы. Готовый раствор должен быть желтым и прозрачным.

Раствор микроэлементов:

Нитрилотриуксусная кислота 1.5 г

MgSO₄ × 7 H₂O 3.0 г

MnSO₄ × H₂O 0.5 г

NaCl 1.0 г

FeSO₄ × 7 H₂O 0.1 г

CoSO₄ × 7 H₂O 0.18 г

CaCl₂ × 2 H₂O 0.1 г

ZnSO₄ × 7 H₂O 0.18 г

CuSO₄ × 5 H₂O 0.01 г

KAl(SO₄)₂ × 12 H₂O 0.02 г

H₃BO₃ 0.01 г

Na₂MoO₄ × 2 H₂O 0.01 г

NiCl₂ × 6 H₂O 0.03 г

Na₂SeO₃ × 5 H₂O 0.3 мг

Na₂WO₄ × 2 H₂O 0.4 мг

Дистиллированная вода 1000.0 мл

Растворить нитрилотриуксусную кислоту, нейтрализуя раствор KOH, внести остальные соли. Довести объем до 1000.0 мл. Довести pH до 7.0, используя KOH.

Раствор витаминов:

Биотин 2.0 мг

Фолиевая кислота 2.0 мг

Пиридоксин-HCl 10.0 мг

Тиамин-HCl × 2 H₂O 5.0 мг

Рибофлавин 5.0 мг

Никотиновая кислота 5.0 мг

D-Ca-пантотенат 5.0 мг

Витамин B₁₂ 0.1 мг

п-Аминобензойная кислота 5.0 мг

Липоевая кислота 5.0 мг

Дистиллированная вода 1000.0 мл

Растворить ингредиенты, кроме серы и сульфида, довести pH до 6.5, продуть среду 100% N₂ в течение 30-45 минут для удаления кислорода. Разлить в атмосфере 100% N₂ в пробирки Хангейта или флаконы под резиновой пробкой, содержащие соответствующее количество серы. Стерилизовать среду, прогревая флаконы на водяной бане по 1-2 часа трижды через 24 часа. Добавить нейтрализованный сульфидный раствор.

Последнее изменение: 06.07.2021