318. СРЕДА ДЛЯ TEPIDIBACILLUS

Морская соль 30.0 г

NaNO₃ 1.0 г

Минеральный эликсир Вольфа (см. ниже) 2.0 мл

VOSO₄ × 5 H₂O раствор (0.01% в/о) 0.5 мл

Na-резазурина раствор (0.1% в/о) 0.5 мл

FeSO₄ × 7 H₂O 0.1 г

NaHCO₃ 1.0 г

Дрожжевой экстракт 0.5 г

D-глюкоза 2.5 г

Витамины раствор (см. ниже) 20.0 мл

Дистиллированная вода 1000.0 мл

Минеральный эликсир Вольфа:

MgSO₄ × 7 H₂O 30.0 г

MnSO₄ × H₂O 5.0 г

NaCl 10.0 г

FeSO₄ × 7 H₂O 1.0 г

CoCl₂ × 6 H₂O 1.8 г

CaCl₂ × 2 H₂O 1.0 г

ZnSO₄ × 7 H₂O 1.8 г

CuSO₄ × 5 H₂O 0.1 г

KAl(SO₄)₂ × 12 H₂O 0.18 г

H₃BO₃ 0.1 г

Na₂MoO₄ × 2 H₂O 0.1 г

Ni (NH₄)₂ (SO₄)₂ × 6 H₂O 2.8 г

Na₂WO₄ × 2 H₂O 0.1 г

Na₂SeO₄ 0.1 г

Дистиллированная вода 1000.0 мл. Довести pH до 1.0 разбавленной H₂SO₄, затем растворить соли в указанном порядке.

Раствор витаминов:

Биотин 2.0 мг

Фолиевая кислота 2.0 мг

Пиридоксин-HCl 10.0 мг

Тиамин-HCl × 2 H₂O 5.0 мг

Рибофлавин 5.0 мг

Никотиновая кислота 5.0 мг

D-Ca-пантотенат 5.0 мг

Витамин B₁₂ 0.1 мг

п-Аминобензойная кислота 5.0 мг

Липоевая кислота 5.0 мг

Дистиллированная вода 1000.0 мл

Растворить ингредиенты (кроме сульфата железа, бикарбоната, дрожжевого экстракта, глюкозы и витаминов), довести pH до 7.0 и продуть среду 100% N2 в течение 30–45 минут, чтобы сделать ее бескислородной. Разлить среду в той же газовой атмосфере в пробирки Хангейта или флаконы под резиновой пробкой и автоклавировать. Добавить сульфат железа, бикарбонат, дрожжевой экстракт, глюкозу и витамины из стерильных исходных бескислородных растворов, приготовленных в атмосфере 100% N₂, и бикарбоната из стерильного базового раствора, приготовленного в атмосфере 80% N₂ и 20% CO₂. Приготовить основной раствор сульфата железа, растворяя 1% (в/о) FeSO₄ × 7 H₂O в 0,1 н. H₂SO₄. Базовые растворы глюкозы и витаминов стерилизовать фильтрацией. Довести pH всей среды до 6,8-7,0. Примечание: может потребоваться добавить 10-20 мг дитионита натрия на литр (например, из 5% (в/о) раствора, свежеприготовленного под 100% N₂ и стерилизованного фильтрованием), если среда не полностью восстановлена после засева.

Последнее изменение: 06.07.2021