333. СРЕДА ДЛЯ ПСИХРОФИЛЬНЫХ METHANOSARCINA

K₂HPO₄ 0.35 г

KH₂PO₄ 0.23 г

NH₄Cl 0.5 г

MgSO₄ × 7 H₂O 0.5 г

CaCl₂ × 2 H₂O 0.25 г

NaCl 2.25 г

FeSO₄ × 7 H₂O (0.1% в/о в 0.1 Н H₂SO₄) 2.0 мл

Раствор микроэлементов SL-10 (см. ниже) 1.0 мл

Дрожжевой экстракт 2.0 г

Казитон 2.0 г

Na-резазурина раствор (0.1% в/о) 0.5 мл

NaHCO₃ 0.85 г

Раствор витаминов (см. ниже) 10.0 мл

Mетанол 10.0 мл

L-Цистеин-HCl × H₂O 0.3 г

Na₂S × 9 H₂O 0.3 г

Дистиллированная вода 1000.0 мл

Раствор микроэлементов SL-10:

HCl (25%; 7.7 M) 10.0 мл

FeCl₂ × 4 H₂O 1.5 г

ZnCl₂ 70.0 мг

MnCl₂ × 4 H₂O 100.0 мг

H₃BO₃ 6.0 мг

CoCl₂ × 6 H₂O 190.0 мг

CuCl₂ × 2 H₂O 2.0 мг

NiCl₂ × 6 H₂O 24.0 мг

Na₂MoO₄ × 2 H₂O 36.0 мг

Дистиллированная вода 990.0 мл

Раствор витаминов:

Биотин 2.0 мг

Фолиевая кислота 2.0 мг

Пиридоксин-HCl 10.0 мг

Тиамин-HCl × 2 H₂O 5.0 мг

Рибофлавин 5.0 мг

Никотиновая кислота 5.0 мг

D-Ca-пантотенат 5.0 мг

Витамин B₁₂ 0.1 мг

п-Аминобензойная кислота 5.0 мг

Липоевая кислота 5.0 мг

Дистиллированная вода 1000.0 мл

Растворить ингредиенты (кроме бикарбоната, витаминов, метанола, цистеина и сульфида) и продуйть среду газовой смесью 80% N₂ и 20% CO₂ в течение 30–45 минут, чтобы сделать ее бескислородной. Затем добавить и растворить бикарбонат, довести pH до 6.8 и разлить среду в той же газовой атмосфере в пробирки Хангейта или флаконы под резиновой пробкой и автоклавировать. Метанол (50%-ный исходный раствор) и восстановители автоклавировать отдельно в атмосфере 100% N₂ в виде концентрированных растворов в плотно закрытых пробирках. Витамины готовить в атмосфере 100% N₂ и стерилизовать фильтрацией. Соответствующие объемы растворов внести в стерильную среду шприцами для подкожных инъекций. При необходимости довести pH среды до 6.5–6.8.

Последнее изменение: 09.07.2021