498. СРЕДА ДЛЯ MAGNETOSPIRILLUM

KH₂PO₄ 0.68 г

NaNO₃ 0.12 г

L(+)-Винная кислота 0.37 г

Янтарная кислота 0.37 г

Ацетат натрия 0.05 г

Дрожжевой экстракт 0.10 г

Модифицированный минеральный раствор Волина (см. ниже) 5.00 мл

Fe(III) хинатный раствор 0.01 M 2.0 мл

Резазурин натрия (0.1% вес/об.) 0.50 мл

Тиогликолят натрия 0.05 г

Раствор витаминов (см. выше) 1.0 мл

Дистиллированная вода 1000.0 мл

Растворяют ингредиенты (за исключением тиогликолята и витаминов) в указанной последовательности и довести pH до 6.75 используя NaOH. Продувают среду 100% N₂ в течение 30-45 мин и разливают при той же газовой атмосфере в бескислородные пробирки Хангейта на 50% от их объема. Закрывают флаконы завинчивающимися крышками и газонепроницаемыми бутилкаучуковыми крышками. Автоклавируют при 121°C в течение 15 мин. Перед посевом добавляют тиогликолят и витамины из исходных растворов, приготовленных в атмосфере 100% азота и стерилизованных фильтрацией. Затем добавляют стерильный воздух (с помощью шприца через резиновый колпачок до концентрации O₂ приблизительно 1% (об./об. ) (например, добавить 1 мл воздуха в пробирку Хангейта общим объемом 16 мл). Сильно восстановленные условия не будут поддерживать рост микроаэрофильного вида Magne-tospirillum. Используют 10% инокулята. Пробирки с питательной средой следует инкубировать в наклонном положении без перемешивания. В процессе роста кислород будет расходоваться и pH повышаться. Для культивирования магнитных клеток мы рекомендуем приготовить жидкую питательную среду, в то время, как полутвердая среда больше подходит для накопления микроаэрофилов.

Модифицированный минеральный раствор Волина:

Нитрилотриуксусная кислота (NTA) 1.50 г

MgSO₄ x 7 H₂O 3.00 г

MnSO₄ x H₂O 0.50 г

NaCl 1.00 г

FeSO₄ x 7 H₂O 0.10 г

CoSO₄ x 7 H₂O 0.18 г

CaCl₂ x 2 H₂O 0.10 г

ZnSO₄ x 7 H₂O 0.18 г

CuSO₄ x 5 H₂O 0.01 г

AlK(SO₄)₂ x 12 H₂O 0.02 г

H₃BO₃ 0.01 г

Na₂MoO₄ x 2 H₂O 0.01 г

NiCl₂ x 6 H₂O 0.03 г

Na₂SeO₃ x 5 H₂O 0.30 мг

Na₂WO₄ x 2 H₂O 0.40 мг

Дистиллированная вода 1000.00 мл

Сначала растворяют NTA доводят pH до 6.5 с помощью KOH, затем добавляют соли. Доводят до конечного pH 7.0 с помощью KOH.

Раствор витаминов:

Витамин B₁₂ 100.00 мг

п-Аминобензойная кислота 80.00 мг

D-(+)-биотин 20.00 мг

Никотиновая кислота 200.00 мг

Пантотенат кальция 100.00 мг

Гидрохлорид пиридоксина 300.00 мг

Тиамин-HCl x 2 H₂O 200.00 мг

Дистиллированная вола 1000.00 мл

Fe(III) хинатный раствор 0.01 M

FeCl₃ x 6 H₂O 4.50 г

Хинная кислота 1.90 г

Дистиллированная вода 1000.00 мл

Стерилизуют фильтрацией в атмосфере 100% азота.

Изменения внесены: 21.05.2026